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广西陆川地区肺炎支原体的分离及P97R1基因的克隆与序列分析
2019-07-31 08:13
广西大学
李伟
支原体肺炎(Mhp)是支原体猪肺炎(MPS)的主要原因。
本研究旨在分离和鉴定广西陆川猪Mhp病原菌和P97R1区基因序列分析,为深入了解和研究毒力特征,流行病学和预防提供理论依据。到。广西陆川猪的Mhp积分
方法:(1)收集广西壮族自治区陆川猪疑似患有MPS的肺组织。在分离和培养常规Mhp病原体后,使用涂片染色和PCR鉴定阳性染色。(2)每日病理组织切片,HE染色观察组织学。科学的特征发生了变化。
通过免疫组织化学定位组织中病原体的分布。通过原位杂交检测和定位Mhp核酸。(3)设计一对引物,参照Mhp基因组序列扩增P97基因的R1区,用基因组DNA扩增P97粘附因子基因的R1区,测定序列。将广西陆川猪PCR产物中Mhp局部株P97基因R1区的碱基组成与推导的氨基酸序列进行比较。
结果:(1)通过液体培养法成功分离出怀疑有MPS的广西陆川猪肺组织中的野生型M11p菌株。通过Wright-Jemsa染色,环形,双极形状等检查液体培养物。观察到多晶型细胞。液体培养物的PCR检测可以扩增目标片段。(2)Mhp阳性肺的病理性HE染色显示典型的间质性肺炎和支气管肺炎,由于融合,肺泡间质增厚,间质增生和炎性细胞浸润肺泡腔缩小并收缩。
支气管壁增厚,上皮细胞脱落,许多炎性细胞渗出,支气管周围淋巴结积聚。
免疫组化显示Mhp阳性信号主要分布在支气管上皮细胞的细胞质和粘膜,炎症细胞周围的光分泌和细胞质中:原位杂交显示mDNA主要是气管中的Mhp和它分布在支气管粘膜表面。
(3)广西陆川猪MhpP97R1基因的碱基组成和推导的氨基酸序列比较显示,广西陆川猪Mhp菌株15株,菌株R1株3株。广西R1二元杂二元Mhp多碱基在该区域发生突变。得到氨基酸序列统计,P97基因R1区的氨基酸重复序列(AAKPV / E)数为9-18,平均值为12,TN重复数为10。常见的菌株突变增加了它们的毒力和依从性。
结论:本研究从广西陆川猪肺组织中分离出一株怀疑有MPS的野生Mhp菌株,并测定了Mhp病原体和核酸在肺组织中的分布:此外,15株广西猪MhpLuchuan和3广西对二元猪Mhp菌株P97基因的R1区进行序列分析和比较,结果表明,广西滦南猪MhpP97基因的R1区发生了突变。


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